Техника изоэлектрического фокусирования в полиакриламидном геле

Техника изоэлектрического фокусирования в полиакриламидном геле

Для определения подтипов трансферрина мы рекомендуем использовать следующую технику изоэлектрического фокусирования в полиакриламидном геле (более подробно см. D. Patzelt, 1984) Изоэлектрическая точка: pH 5,6 (FeiTf). Амфолиты-носители: pH 5—7 0,6 мл pH 4—6 0,4 мл. Электродные растворы: анод — 0,1 М глютаминовая кислота в 0,5 М борной кислоте; катод — 0,2 М NaOH. Приготовление сывороток: разведение в соотношении 1 : 5 0,25% раствором железоаммониевых квасцов; реакция в холодильнике в течение ночи. Приготовление сывороток: разведение в соотношении 1 : 5 0,25% раствором железоаммониевых квасцов; реакция в холодильнике в течение ночи. Мишени для внесения проб: 5×5 мм Место для внесения проб: 2 см от катодного края пластины.

Электрические показатели (максимальные): Р = 10 Вт; 1=10 мА; U=1600 В. Температура охлаждения: 10°С Предварительное фокусирование: не проводится. Изоэлектрофокусирование: с пробами — 30 мин, без проб — 2,5 ч. Фиксация: 30 мин (3% раствор сульфосалициловой кислоты в 33% метаноле). Окрашивание: кумасси синий (универсальный способ) в течение 30 мин при 60 °С. 2252 Фенотипы и генетика Несмотря на то что трансферрины были известны сравнительно давно, их генетически детерминированный полиморфизм был открыт лишь в результате исследований О. Smithies (1957), а также W R Horsfall, О. Smithies (1958) Поскольку генетитический полиморфизм трансферринов в силу своей малой информативности долгое время не находил практического применения в судебно-медицинских экспертизах спорного отцовства, то разработке проблемы изучения генетики этой сывороточной системы в Европе уделяли недостаточное внимание.

Это объясняется в первую очередь тем, что генетические варианты трансферринов, отличающиеся от чрезвычайно распространенного «стандартного» типа ТГСС, встречались крайне редко, в связи с чем вероятность исключения отцовства по этой системе среди европейского населения при условии использования классического электрофоретического метода исследования была крайне низкой и составляла приблизительно 1 %.

1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд (Еще не оценили)
Loading...

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Можно использовать следующие HTML-теги и атрибуты: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <strike> <strong>

Подтвердите, что Вы не бот — выберите человечка с поднятой рукой: